Identificación de inhibidores móviles en oposición a la replicación del virus Chikungunya mediante un cDNA

Identificación de inhibidores móviles frente a la replicación del virus Chikungunya mediante una clonación de expresión de ADNc mezclada con MinION

  • La clonación de expresión de cDNA ha demostrado ser una estrategia sólida dentro de la búsqueda de elementos móviles que gestionan la replicación del virus. En este examen, el cribado de bibliotecas de cDNA utilizando un pool de cDNA derivado de células humanas y porcinas tratadas con interferón se mezcló con el secuenciador MinION para establecer genes móviles que inhiben la replicación del virus Chikungunya (CHIKV).
  • Un problema de infección del CHIKV a las células Vero transducidas con la biblioteca de cDNA produjo células resistentes al virus. A continuación, la secuencia MinION de los cDNAs extraídos de las células supervivientes reveló que los marcos de estudio abiertos de TOM7, S100A16, el tipo N-terminal truncado de ECI1 (ECI1ΔN59), y RPL29 se han insertado en lotes de las células.
  • Es importante destacar que se descubrió que la expresión transitoria de TOM7, S100A16 y ECI1ΔN59 inhibía la replicación del CHIKV en las células Huh7, lo que indica que estos elementos móviles han sido sin duda moléculas anti-CHIKV.
  • Así pues, nuestro examen demostró que la clonación de la expresión del ADNc mezclada con el secuenciador MinION permitía una detección rápida y completa de los inhibidores móviles en oposición al CHIKV.
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Alpha Diagnostics
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piggenome

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Identificación de un nuevo alelo KIR3DL3*064 mediante clonación y secuenciación de ADNc

 

Objetivo: Informar sobre un nuevo alelo KIR3DL3 reconocido en una persona del sur de China.

Estrategias: Se recogió un patrón de sangre periférica de un donante de sangre voluntario con resultado no concluyente por tipificación basada en la secuencia de KIR3DL3 (SBT). Se extrajo el ARNm completo y se sometió a transcripción inversa para adquirir el ADNc de KIR3DL3, que luego se amplificó por PCR con un par de cebadores específicos de KIR3DL3. El producto se sometió a la clonación y secuenciación del ADNc.

 

Resultados: La clonación y la secuenciación del ADNc han reconocido un alelo KIR3DL3*00802 de tipo amplio y un nuevo alelo KIR3DL3*064. Este último difiere del KIR3DL3*00601 por una variante sin sentido en el codón 374 [c.1184 C>T (p.Thr374Ile)] en el exón 9. El nuevo alelo KIR3DL3 ha sido asignado formalmente por el subcomité KIR del Comité de Nomenclatura del Grupo Mundial del Bienestar para elementos del sistema HLA.

Conclusión: la clonación y la secuenciación del cDNA también podrían utilizarse para distinguir los extremos no concluyentes en KIR3DL3 SBT con el fin de establecer nuevos alelos KIR.

 

Enfermedades del anillo de la manzana y de la arruga de la manzana: Consecución de los postulados de Koch mediante la evaluación del vioma, la amplificación del ADNc de tamaño completo de los genomas virales, la transcripción in vitro de los ARN virales infecciosos y la réplica de los signos en los frutos de los manzanos inoculados con ARN virales

 

El anillo rojizo de la manzana y la arruga de la manzana son enfermedades transmitidas por injertos que se notificaron por primera vez hace más de 60 años, pero en la actualidad no se ha demostrado claramente la relación entre un virus seleccionado (variante) y la enfermedad.

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

En este examen, llevamos a cabo la siguiente colección de experimentos para establecer los virus causales (variantes) de esas enfermedades de la manzana; (1) evaluación completa por secuenciación de próxima generación de todos los virus en cada manzano afectado por la enfermedad del anillo rojizo o de la arruga inexperta,

 

(2) amplificación del ADNc genómico de longitud completa de los virus utilizando cebadores que contengan el promotor T3 y la transcripción in vitro de los ARN víricos infecciosos, (3) inoculación de los transcritos de ARN víricos a cada uno de los cultivos herbáceos y de manzanas, (4) evaluación de las variantes de secuencia de los virus presentes en los cultivos contaminados (5) la retroinoculación de variantes de secuencia de los virus candidatos a las plántulas de manzana mezcladas con el know-how de floración inducida por el virus utilizando el vector del virus esférico latente de la manzana para reproducir el síntoma en la fruta tan pronto como sea posible, y

 

(6) réplica de los signos en los frutos de las manzanas inoculadas con las variantes de la secuencia y el reaislamiento de cada variante del virus en las manzanas que presentaban signos en los frutos.

 

Los resultados confirmaron que una de las numerosas variantes de la secuencia del virus de la mancha clorótica de la hoja de la manzana provoca una oxidación en forma de anillo en los frutos de la madera de la manzana contaminada y que una variante de la secuencia del virus de la picadura del tallo de la manzana provoca con toda probabilidad signos de arrugas inexpertas en una fruta de la manzana contaminada.

 

Protein A protein
Fitzgerald
Protein A Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

Por lo tanto, hemos sido capaces de cumplir los postulados de Koch para mostrar la etiología viral de cada una de las enfermedades del anillo de manzana y de las arrugas de la manzana. Además, sugerimos un sistema experimental que puede demostrar si un virus presente en los tejidos enfermos es el patógeno responsable de las enfermedades cuando la etiología es indeterminada.

 

Identificación y caracterización de un ADNc que codifica una proteína específica del gametocito del parásito coccidial aviar Eimeria necatrix

 

Las proteínas de los gametocitos de Eimeria spp. son componentes esenciales de la pared del ooquiste, y algunas de estas proteínas se han analizado para identificar objetivos de vacunas que bloqueen la transmisión de la coccidiosis aviar. En el presente estudio se clonó y secuenció un ADNc de gametocitos de E. necatrix. El ADNc tiene 1.473 pb de longitud y codifica una proteína de 490 aminoácidos que contiene un dominio rico en tirosina-serina (Tyr/Ser) y un dominio rico en prolina-metionina (Pro/Met).

Un análisis cuantitativo de PCR en tiempo real (qPCR) mostró que el cDNA se expresa sólo durante la gametogénesis. Se expresó un fragmento que contenía el dominio rico en Tyr/Ser (rEnGAM59) en células Escherichia coli BL21 (DE3). La inmunotransferencia demostró que rEnGAM59 era reconocido por el suero de pollos convalecientes tras la infección con E. necatrix, y que un anticuerpo anti-rEnGAM59 reconocía una proteína de ∼59 kDa y otras dos proteínas (∼35 kDa y ∼33 kDa) en extractos de gametocitos. Un ensayo de inmunofluorescencia mostró que el anticuerpo anti-rEnGAM59 reconocía los cuerpos formadores de pared en los macrogametocitos y en las paredes de los ooquistes. Se llevó a cabo un ensayo de vacunación y provocación in vivo para comprobar la posible utilidad del rEnGAM59 como vacuna. Los pollos inmunizados obtuvieron mejores resultados que los no inmunizados y los desafiados (control positivo).

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
AMSBIO
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Comprobación de las clases en Dehradun

Las puntuaciones de las lesiones intestinales fueron significativamente menores en los grupos inmunizados que en el grupo de control positivo (P < 0,05). Por el contrario, el aumento de peso corporal (BWG) fue significativamente mayor en los grupos inmunizados que en el grupo de control positivo (P < 0,05). No hubo diferencias significativas en las puntuaciones de las lesiones ni en la ganancia de peso corporal entre los grupos inmunizados con proteína rEnGAM59 o con ooquistes vivos (P > 0,05).

Los pollos inmunizados con la proteína rEnGAM59 presentaron una respuesta sérica de IgY específica al antígeno significativamente mayor (P < 0,05). La proteína rEnGAM59 puede utilizarse como antígeno candidato para desarrollar una vacuna recombinante contra la coccidiosis.

 

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QY-E80092 Qayee Biotechnology
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Genética inversa de rotavirus: Generación de rotavirus humanos recombinantes a partir de sólo 11 ADNc que codifican el genoma del rotavirus
Hace muy poco se estableció un sistema de genética inversa para rotavirus animales basado enteramente en plásmidos. Mejoramos el sistema de genética inversa para generar rotavirus recombinantes transfectando sólo 11 plásmidos T7 para sus 11 genes bajo la condición de aumentar la proporción (3 ó 5 veces) de los plásmidos de ADNc para los genes NSP2 y NSP5 (sistema de 11 plásmidos).

Utilizando este sistema altamente eficiente, diseñamos los primeros rotavirus recombinantes infecciosos que albergan genes de proteínas fluorescentes (EGFP y mCherry). Además de estos virus animales recombinantes, también se generó el primer rotavirus humano recombinante infeccioso (cepa KU (G1P[8]) con el sistema de 11 plásmidos con algunas modificaciones.

La disponibilidad de rotavirus humanos recombinantes proporcionará una plataforma genética para comprender mejor la replicación, la patogenicidad y otras características biológicas de este virus de importancia médica, y permitirá el desarrollo racional de vacunas contra el rotavirus humano de próxima generación.

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