Reunión en la levadura del ADNc infeccioso del Coronavirus

Reunión en la levadura de clones de ADNc infecciosos de coronavirus utilizando una tubería de genómica artificial

 

Los métodos de genética inversa basados en Escherichia coli y en el virus vaccinia se han utilizado ampliamente para la manipulación y la ingeniería de los genomas de los coronavirus. Estos métodos, sin embargo, presentan una serie de limitaciones y son generalmente difíciles de determinar en un método bien programado para los virus (re)crecientes. En este capítulo, presentamos una nueva plataforma de genética inversa común para la reunión y la ingeniería de ADNc infecciosos de longitud completa utilizando la clonación de recombinación asociada a la transformación basada en la levadura.

Esta novedosa técnica de reunión no sólo termina en ADNc infecciosos de longitud completa de coronavirus clonados dentro de la levadura Saccharomyces cerevisiae, sino que además fomenta y acelera la manipulación de sus genomas.

Tal plataforma es ampliamente relevante para el vecindario científico, porque no requiere ningún equipo particular y podría llevarse a cabo en un entorno de laboratorio ordinario. El protocolo descrito podría adaptarse de forma sencilla a casi todos los coronavirus reconocidos o en ascenso, como el coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS-CoV).

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Los híbridos de ARN-ADN median la transposición a través de diferentes mecanismos

Los retrotransposones pueden representar la mitad de los genomas eucariotas. La desregulación de los retrotransposones desestabiliza los genomas y se ha relacionado con varias enfermedades humanas. Entre los nuevos reguladores de la retromovilidad se encuentran las estructuras híbridas de ARN-ADN conocidas como bucles R. Se ha demostrado que la acumulación de estas estructuras en los elementos transposones de la levadura 1 (Ty1) aumenta la retromovilidad de Ty1 a través de un mecanismo desconocido.

Aquí, a través de un cribado genético dirigido, identificamos el mutante de levadura rnh1Δ rad27Δ, que carecía tanto del inhibidor de Ty1 Rad27 como del supresor de híbridos ARN-ADN Rnh1. El mutante presentaba niveles elevados de híbridos ARN-ADN asociados a Ty1 que promovían la movilidad de Ty1. Además, en este mutante rnh1Δ rad27Δ, pero no en el mutante doble RNasa H rnh1Δ rnh201Δ, los híbridos ARN-ADN existían preferentemente como estructuras de ácido nucleico dúplex y aumentaban la movilidad de Ty1 de forma dependiente de Rad52.

Los datos indican que en las células que carecen de híbridos de ARN-ADN y de represores de Ty1, los niveles elevados de híbridos de ARN-ADN, que se asocian con estructuras de ácido nucleico dúplex, aumentan la movilidad de Ty1 a través de un mecanismo dependiente de Rad52.

Por el contrario, en las células que carecen únicamente de represores de híbridos de ARN-ADN, los niveles elevados de híbridos de ARN-ADN, que se asocian con estructuras de ácido nucleico triplex, impulsan la movilidad de Ty1 a través de un proceso independiente de Rad52. Proponemos que los híbridos dúplex y triplex de ARN-ADN promueven la movilidad del transposón a través de mecanismos dependientes o independientes de Rad52.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier

Identificación de genes sensibles a la salinidad en la lavanda mediante cDNA-AFLP

Actualmente existe una demanda mundial de lavanda como planta medicinal importante y fuente de aceites esenciales. El agua dulce y las tierras de cultivo son dos factores importantes que impiden el cultivo extensivo de plantas medicinales en Irán. El agua salada de los mares y el suelo salado pueden ser nuevos recursos para el uso agrícola, especialmente para las plantas medicinales.

Intentamos ampliar nuestros conocimientos sobre el genoma de Lavandula angustifolia y las bases moleculares de su tolerancia a la salinidad utilizando el polimorfismo de longitud de fragmentos amplificados de ADNc (ADNc-AFLP) para investigar los cambios en los transcriptomas de las plantas en respuesta al NaCl.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier
Chicken thrombomodulin,TM ELISA KIT ELISA
QY-E80092 Qayee Biotechnology
Oxycodone ELISA
EK7130 BosterBio
Amphiphysin ELISA
LF-EK0189 Abfrontier

Todos los fragmentos derivados de la transcripción (TDF) identificados se asignaron como nuevos genes de L. angustifolia relacionados con la transducción de señales, la regulación de la expresión génica, el splicing alternativo, la autofagia y la biosíntesis de metabolitos secundarios. El análisis qRT-PCR de los TDF en respuesta a diferentes concentraciones de NaCl reveló varios niveles de mRNA de los genes identificados en esta planta. Nuestros hallazgos proporcionaron conocimientos primarios sobre la respuesta molecular de L. angustifolia a la salinidad.

 

piggenome

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
ranavirus PCR kit
Bioingentech

Síntesis de clones infecciosos de ADNc de tamaño completo del virus del mosaico de la soja e identificación intencionada de un aminoácido clave dentro del supresor del silenciamiento Hc-Professional

 

El virus del mosaico de la soja (SMV), que pertenece a los Potyviridae, provoca reducciones vitales en el rendimiento de la soja y en la calidad de las semillas. En este examen, se han construido clones infecciosos para la presión N1 del SMV sin etiqueta y con el sistema de recombinación homóloga en levadura, respectivamente.

Cada uno de los clones infecciosos es apropiado para la agroinfiltración en el hospedador maniquí benthamiana y presenta una infectividad robusta para el hospedador puro soja y varias otras especies de leguminosas diferentes. Cada uno de los clones infecciosos se ha transmitido por semilla y ha provocado signos típicos del virus en las semillas y los cultivos de la progenie. Utilizamos el clon infeccioso de SMV-GFP para examinar adicionalmente la función de los aminoácidos clave dentro del supresor del silenciamiento componente-proteína (Hc-Profesional).

Entre los doce mutantes de sustitución de aminoácidos, la coexpresión del mutante 2 -con una sustitución Asparagina→Leucina en el lugar 182 del motivo FRNK (Phe-Arg-Asn-Lys)- atenuó los signos virales y alivió el retraso del progreso del huésped provocado por el SMV.

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
AMSBIO
MagSi-WAX
AMSBIO

Además, el mutante Hc-Prom2 confirmó una oligomerización más fuerte que el Hc-Profesional de tipo salvaje. En conjunto, los clones infecciosos de SMV pueden ser útiles para la investigación de las interacciones huésped-SMV y la caracterización de genes útiles en la soja y las especies de leguminosas asociadas, en particular por medio de las propiedades de transmisión de semillas. Además, el clon infeccioso de SMV-GFP facilitará incluso la investigación útil de cada uno de los genes del virus y del huésped en un sistema de expresión transitoria de Benthamiana.

Protein A protein
Fitzgerald
Protein A Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

Perfil de los genes tolerantes al Cd del arroz mediante el cribado de la supervivencia de la biblioteca de cDNA basada en la levadura

 

La bioacumulación de cadmio (Cd) en los cultivos y en la siguiente cadena alimentaria ha suscitado intensas consideraciones. Sin embargo, los mecanismos moleculares subyacentes de la tolerancia al Cd de las plantas siguen sin aclararse desde el punto de vista de los nuevos genes candidatos.

Aquí describimos una estrategia extremadamente amigable con el medio ambiente para averiguar preliminarmente los genes tolerantes al Cd de arroz por medio de la detección de supervivencia de la biblioteca de cDNA basada en la levadura mezclada con la técnica de secuenciación de alto rendimiento. Alrededor de 690 isoformas de genes han sido reconocidos como candidatos tolerantes al Cd utilizando esta estrategia de escopeta.

Entre los muchos genes tolerantes al Cd reconocidos, un número de clases de genes que recuerdan al inhibidor BAX (BI), los elementos de transcripción NAC y los Elementos de Alcalinización Rápida (RALFs) han sido de curiosidad específica, y su desempeño de la tolerancia al Cd fue validado adicionalmente a través de la expresión heteróloga, que instó a que SNAC1, RALF12, OsBI-1 pueden conferir la tolerancia al Cd en la levadura y las hojas de tabaco.

En cuanto a los genes relacionados con el transporte de iones, la proteína isoprenilada HIPP42, asociada a metales pesados (HMAD) y tolerante al Cd, fue significativamente notable. El esclarecimiento adicional de los genes relacionados con la tolerancia al Cd en el arroz beneficiará las acciones agrícolas.

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

Transcriptómica unicelular de las células inmunitarias: Aislamiento celular y era de bibliotecas de cDNA para scRNA-Seq

La secuenciación de ARN unicelular (scRNA-seq) permite una evaluación completa del transcriptoma de células de personas concretas mediante la secuenciación de nueva generación. ScRNA-seq ofrece una estrategia imparcial para analizar la heterogeneidad móvil y la dinámica de varios métodos orgánicos, junto con el sistema inmunitario. La optimización de los procedimientos técnicos llevados a cabo antes de la evaluación de RNA-seq es crucial para el éxito de un experimento de scRNA-seq.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1
Frit Kit
FRIT-KIT
Column Packing Kit
PACK-KIT

Aquí mismo, se describen tres procedimientos experimentales principales: (1) el aislamiento de células T CD8a+ inmunes a partir de tejido murino principal, (2) la tecnología de bibliotecas de ADNc de una sola célula utilizando el Controlador de Cromos 10× y la Respuesta de 3′ de Cromos de una sola célula, y (3) la gestión de la alta calidad de la biblioteca de ADNc. En este protocolo, las células T CD8a+ se extraen del tejido del bazo murino, pero cualquier tipo de célula puede ser enriquecida y utilizada para la tecnología de bibliotecas de ADNc de una sola célula y los experimentos posteriores de ARN-seq.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
Alpha Diagnostics
Frit Kit
Next Advance
Column Packing Kit
Next Advance

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