Identificación de genes sensibles a la salinidad en la lavanda

Identificación de genes sensibles a la salinidad en la lavanda mediante cDNA-AFLP

 

  • Actualmente existe una demanda mundial de lavanda como gran planta medicinal y suministro de importantes aceites. El agua dulce y las tierras de cultivo son dos elementos principales que impiden el cultivo intensivo de plantas medicinales en Irán. El agua salina de los mares y los suelos salinos también podrían ser nuevas fuentes para el uso agrícola, en particular para los cultivos medicinales.
  • Intentamos aumentar nuestros datos del genoma de Lavandulaangustifolia y el fundamento molecular de su tolerancia a la salinidad mediante el uso del polimorfismo de tamaño de fragmentos amplificados de ADNc (ADNc-AFLP) para analizar los ajustes en los transcriptomas de las plantas en respuesta al NaCl.
  • Todos los fragmentos derivados de la transcripción reconocidos (TDF) han sido asignados como nuevos genes angustifolia asociados a la transducción de señales, la regulación de la expresión génica, el empalme diferente, la autofagia, y la biosíntesis de metabolitos secundarios. La evaluación qRT-PCR de los TDF en respuesta a concentraciones completamente diferentes de NaCl reveló rangos variados de ARNm de los genes reconocidos en esta planta.
  • Nuestros hallazgos proporcionaron conocimientos principales sobre la respuesta molecular de la angustifolia a la salinidad.
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piggenome

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Identificación y caracterización de un ADNc que codifica una proteína específica de los gametocitos del parásito coccidial aviar Eimerianecatrix

 

Las proteínas de los gametocitos de Eimeria spp. son elementos importantes de la pared del ooquiste, y algunas de estas proteínas se han analizado para establecer objetivos de vacunas que bloqueen la transmisión frente a la coccidiosis aviar. En el presente estudio se clonó y secuenció un ADNc de gametocitos de E. necatrix. El ADNc tiene un tamaño de 1.473 pb y codifica una proteína de 490 aminoácidos que contiene una zona rica en tirosina-serina (Tyr/Ser) y otra rica en prolina-metionina (Professional/Met).

 

Una evaluación cuantitativa por PCR en tiempo real (qPCR) confirmó que el cDNA se expresa únicamente durante la gametogénesis. Una fracción que contiene la zona rica en Tyr/Ser (rEnGAM59) se expresó en células Escherichia coli BL21 (DE3). La inmunotransferencia confirmó que la rEnGAM59 era reconocida por el suero de pollos convalecientes tras una infección con E. necatrix, y que un anticuerpo anti-rEnGAM59 reconocía una proteína ∼59 kDa y

 

dos proteínas diferentes (∼35 kDa y ∼33 kDa) en extractos de gametocitos. Un ensayo de inmunofluorescencia confirmó que el anticuerpo anti-rEnGAM59 reconocía los cuerpos formadores de pared dentro de los macrogametocitos y los tabiques de ooquistes. Se llevó a cabo un ensayo de vacunación in vivo y de problemas para comprobar la posible utilidad de rEnGAM59 como vacuna.

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

 

Los pollos inmunizados obtuvieron mejores resultados que los no inmunizados y los desafiados (manejo constructivo). Las puntuaciones de las lesiones intestinales fueron considerablemente menores en los equipos inmunizados que en el grupo de gestión constructiva (P < 0,05). En cambio, los aspectos positivos del peso corporal (BWG) han sido considerablemente mayores en los equipos inmunizados que en el grupo de manejo constructivo (P < 0,05). No ha habido variaciones vitales dentro de las puntuaciones de las lesiones y BWG entre los equipos inmunizados con proteína rEnGAM59 o con ooquistes de estancia (P > 0,05). Los pollos inmunizados con la proteína rEnGAM59 tuvieron una respuesta sérica de IgY específica al antígeno considerablemente mayor (P < 0,05). La proteína rEnGAM59 puede utilizarse como antígeno candidato para desarrollar una vacuna recombinante contra la coccidiosis.

Genética inversa de rotavirus: Generación de rotavirus humanos recombinantes a partir de sólo 11 ADNc que codifican el genoma del rotavirus

 

Hace muy poco tiempo se estableció un sistema de genética inversa basado completamente en plásmidos para los rotavirus animales. Hemos mejorado el sistema de genética inversa para generar rotavirus recombinantes transfectando únicamente 11 plásmidos T7 para sus 11 genes bajo la situación de acelerar la proporción (3 o 5 veces) de los plásmidos de ADNc para los genes NSP2 y NSP5 (sistema de 11 plásmidos).

Utilizando este sistema extremadamente respetuoso con el medio ambiente, diseñamos los rotavirus infecciosos primarios que albergan genes de proteínas fluorescentes (EGFP y mCherry). Junto con estos virus animales recombinantes, también se generó el primer rotavirus humano recombinante infeccioso (presión KU (G1P[8])) con el sistema de 11 plásmidos con algunas modificaciones.

El suministro de rotavirus humanos recombinantes presentará una plataforma genética para una mayor comprensión de la replicación, la patogenicidad y diferentes rasgos orgánicos de este virus médicamente vital y permitirá la mejora racional de las vacunas de rotavirus humanos de próxima generación.

Protein A protein
Fitzgerald
Protein A Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

 

Papel de la respuesta inmunitaria de los linfocitos T cDNA 7 en la patología de la enfermedad aguda de injerto contra huésped
La activación de los linfocitos T es el factor iniciador de la aparición de la enfermedad aguda de injerto contra huésped (aGVHD), y el antígeno 4 de los linfocitos T citotóxicos (CTLA-4) es el receptor inhibidor de la activación de las células T. El ADNc 7 de la respuesta inmunitaria de las células T (TIRC7) se considera un regulador ascendente de CTLA-4; sin embargo, se sabe poco sobre los efectos de TIRC7 en la regulación de CTLA-4 en la aGVHD. El propósito del presente estudio fue evaluar los efectos reguladores de TIRC7 en la aGVHD, principalmente en la patología.

Los ratones receptores fueron expuestos a una dosis de precondicionamiento de 7,5 Gy de irradiación el día del trasplante y fueron divididos en los siguientes grupos Grupo de control en blanco, grupo de control de trasplante de médula ósea, grupo de irradiación corporal total, grupo de EICH leve-moderada y grupo de EICH grave. Según la diferente administración de los anticuerpos monoclonales CTLA-4 y TIRC7, los grupos de EICH leve-moderada y grave se dividieron aleatoriamente en los grupos de trasplante de células madre hematopoyéticas (TCMH) y TCMH + CTLA-4/TIRC7.

Los ratones receptores fueron sacrificados en diferentes momentos después del HSCT para el análisis histopatológico mediante tinción con hematoxilina y eosina. En comparación con el grupo de control y los demás grupos experimentales, los ratones del grupo combinado de CTLA-4 y TIRC7 mostraron una mejora de la lesión patológica y una menor puntuación de la patología en el hígado, el pulmón y el intestino. Estos datos revelaron que la inyección intraperitoneal de anticuerpos monoclonales anti-TIRC7 y/o anti-CTLA-4 en ratones podía aliviar eficazmente la gravedad de la aGVHD.

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
AMSBIO
MagSi-WAX
AMSBIO

Construcción de una biblioteca de expresión de cDNA en un vector binario utilizando una enzima de clonación
La clonación independiente de la ligación (LIC), como el ensamblaje de Gibson, tiende a producir clones sin inserto, dependiendo de las secuencias presentes en los extremos de los vectores linealizados. Nosotros utilizamos un método de LIC mediado por enzimas de mellado (NE-LIC) para construir una biblioteca de cDNA en un vector binario pER8. Antes de construir la biblioteca de cDNA, se llevaron a cabo experimentos piloto, en los que se clonó la secuencia codificadora de GUS en pER8 utilizando NE-LIC.

Aproximadamente el 12% de los ADNs de los vectores de entrada se convirtieron en plásmidos portadores de un inserto de GUS, y no se detectaron plásmidos sin inserto, lo que indica que esta estrategia es muy eficaz para la clonación con el vector binario pER8. Por lo tanto, se adoptó el NE-LIC para construir una biblioteca de cDNA en pER8, utilizando cDNA que fue amplificado por PCR a partir de una biblioteca construida en otro vector. Como resultado, se construyó con éxito una biblioteca de ADNc en pER8.

Durante la construcción de la biblioteca, es importante excluir los plásmidos sin inserción, ya que la contaminación de los plásmidos sin inserción disminuye la eficacia del cribado. Por lo tanto, el NE-LIC es útil para la construcción de bibliotecas de cDNA.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
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MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
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Bioingentech
ranavirus PCR kit
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Fuentes :

  1. NCBI
  2. Gentaur

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